RNA提取純化操作過(guò)程：

1. 加入AMPure XP 磁珠試劑
2. 磁珠與核酸結(jié)合
3. 結(jié)合有核酸的磁珠與雜質(zhì)分離
4. 乙醇洗滌
5. 加入洗脫液
6. 轉(zhuǎn)移洗脫產(chǎn)物

RNA提取注意事項(xiàng)：

1.RNA在細(xì)胞內(nèi)極易降解，樣本選擇時(shí)***定要選取新鮮的樣本組織或者取樣后迅速低溫處理（液氮速凍）；樣本出現(xiàn)多次反復(fù)凍融后，RNA得率會(huì)嚴(yán)重下降，也會(huì)導(dǎo)致RNA降解；RNA提取環(huán)境要保持無(wú)RNA酶污染；

2.RNA容易受到環(huán)境污染導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解，建議實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意更換實(shí)驗(yàn)手套，使用所有耗材應(yīng)該均無(wú)RNA酶的***次性耗材；

3.試劑盒中BufferEB中含有少量EDTA，可能影響下游實(shí)驗(yàn)，使用時(shí)適當(dāng)稀釋?zhuān)绻闷渌疵撘合疵?，要確保PH>7.5，PH過(guò)低影響洗脫效率；

4.離心柱漂洗完成后，盡可能烘干柱膜上殘留乙醇，殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率和下游實(shí)驗(yàn)效果；柱膜也不建議過(guò)度干燥，沒(méi)有乙醇味道殘留***好，如果過(guò)度干燥可能影響RNA溶解；如果A260/230值過(guò)低，說(shuō)明樣本提取過(guò)程中漂洗不徹底，有鹽離子殘留，建議增加漂洗次數(shù)；

5.對(duì)于RNA提取，A260/280<1.9說(shuō)明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脫樣本時(shí)沒(méi)有使用BufferEB，而使用ddH20（確保無(wú)RNA酶），比值或偏低，因?yàn)镻h值會(huì)影響吸光值，并不表示樣本純度低；

6.如果提取的樣本RNA發(fā)生嚴(yán)重降解，可能是由于裂解液沒(méi)能完全滅活樣本中RNA酶，建議增加裂解液使用量（具體參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）或者降低樣本初始量；

7.RNA完整性可以通過(guò)超微量核酸檢測(cè)儀檢測(cè)或者瓊脂糖凝膠電泳（電泳條件：膠濃度1%；1XTAE電泳緩沖液）來(lái)判斷；***般樣本RNA電泳條帶為兩條帶，對(duì)于植物樣本，有可能存在葉綠體RNA干擾，條帶數(shù)量大于4條，并不表示RNA提取發(fā)生降解；

8.電泳環(huán)境受到RNA酶污染，也會(huì)造成RNA降解，電泳檢測(cè)不準(zhǔn)確，確保電泳過(guò)程中電泳緩沖液，上樣緩沖液無(wú)RNA酶污染；

9.RNA提取***般是傳統(tǒng)TRIzol方法和改進(jìn)的柱式方法；對(duì)于TRIzol法進(jìn)本可以提取大部分樣本RNA，但是對(duì)于多糖多酚植物樣本，建議使用者盡量選擇具有針對(duì)性的試劑盒（參見(jiàn)目錄），傳統(tǒng)TRIzol法無(wú)法有效去除多糖多酚這些次生代謝物；

10.對(duì)于植物樣本，樣本處理量無(wú)法統(tǒng)***確定，對(duì)于***般樣本（煙草，擬南芥等），提取量不超過(guò)100mg鮮重組織或者20mg干重組織，對(duì)于復(fù)雜樣本，建議初始樣本量不超過(guò)50mg鮮重或者10mg干重組織；如果需要較高的RNA量，可以采取多管濃縮的方法提取RNA;

11.對(duì)于植物樣本，如果離心時(shí)堵塞離心柱，建議減少初始樣本量；

12.對(duì)于血液樣本，如果樣本中含有血塊，說(shuō)明樣本收集時(shí)未加入血液抗凝劑；建議重新收集樣本并加入EDTA，肝素，檸檬酸等抗凝劑；

13.RNA濃度及純度判斷：[RNA]μg/ml=A260 x稀釋倍數(shù)x40.0 （40.0：RNA的平均吸收系數(shù)）